1．所需试剂：

a．硫酸（比重1.84）

b．NaOH溶液：400gNaOH溶于1000ml的水中

c：2％ H3BO3

d．0.1N HCI

e．催化剂：硒粉或硒片+无水硫酸钠（1：1000）

f．指示剂：0.1％甲基红+0.5％溴甲酚绿（1：1）

g．蒸馏水

2．样品消化：

样品经粉碎后通过40-60目筛，称取0.5—1g（视含氮量而增减）放入已洗涤烘干的消化管中，并加催化剂硒片1片和10ml硫酸。

将消化管分别放入消化架各孔中，然后将其置于消化炉上。在排污管的与消化管套接的口上套上密封圈，然后将排污管与位于消化炉上的消化管的各口子对应套好，并使其不漏气。再在排污管的弯嘴上套上橡胶管，橡胶管的另一端套在白色的抽气三通的中间的水嘴上，抽气三通的进水口用橡胶管连接到水龙头上，抽气三通的出水口通过橡胶管引入水池的下水道中（见图2），并打开水龙头，使水量适中，以既能抽掉消化过程中所产生的废气，又能节约用水为好。打开消化炉的电源开关，有温控的消化炉需先设定好温度，无温控的消化炉应先将电压调至最大，过20分钟左右再将电压调到200V左右。40分钟—1小时左右待样品变色即消化完毕。

3．蒸馏前的准备工作：

⑴．在蒸馏器机箱右侧的对应水嘴上接上相应的橡胶管：即在标有NaOH的水嘴上套上橡胶管，橡胶管的另一端放入盛有NaOH溶液的容器中。在标有H2O的水嘴上套上橡胶管，橡胶管的另一端放入盛有蒸馏水的容器中。在标有冷却水的水嘴上用橡胶管连接到水龙头上。在标有排水的水嘴上套上橡胶管，橡胶管的另一端放入水斗中。在标有出水的水嘴上套上橡胶管，橡胶管的另一端也放入水斗中。打开水龙头，使水量适中。

⑵．在250ml的三角接收瓶中加入50ml 2％的H3BO3和2—3滴混合指示剂，然后将接收瓶套在接收管上后置于接收瓶托架上，调节托架的高低使接收液管口浸没在H3BO3液体中。

⑶．将电源线一端插入蒸馏器机箱左侧下方对应的插孔中，另一端插入电源插座中，暂时先不要打开电源开关。

    仪器所用的时间控制器采用4位数码管显示，在数码管的下面有一排5个小框，其中中间的那个小框是秒（S）、分（M）、时（H）调节框，其余的是数字设定框。在调节框左边的2位数字是整数部分。每个小框的上面和下面都有相应的调节键，上面为“减”调节键，下面为“加”调节键。可根据自己的不同需要来进行设定。

设定蒸馏时间、加水时间和加碱时间(加水量和加碱量是通过时间控制器控制加水泵和加碱泵的工作时间长短来实现的)：

a.             蒸馏时间设定——以收集液达到150ml（150ml收集液是指不包括50ml的硼酸溶

液的量）计，如果你是在冷水状态下（当天第一次使用，此时蒸发炉内的水是冷的，此称为冷水状态，而从第二次开始则为热水状态）使用，可设定蒸馏时间为14分钟左右；如果是在热水状态下，可设定蒸馏时间为10分30秒~11分钟左右。

b.             加水时间设定——如以加水量10ml计，一般只要设定1.5~2秒左右。

c.             加碱时间设定——如以加碱量50ml计，一般只要设定3.5~4秒左右。

这里需要说明的是，3个时间的设定必须在电源开关不打开的状态下进行，如果你是在

电源开关打开的状态下进行设定，则在设定好以后必须先将电源开关关闭，然后再打开，系统才予以认可。以上列出的蒸馏时间、加水时间、加碱时间都是我们做实验得出的结果，不一定和用户的实际情况一致，仅供用户在使用时参考。

设置好的各个时间参数在关闭电源开关后不会丢失。

4. 蒸馏：

以上工作全部完成后，按下工作键后仪器将按以下顺序进行工作：先向蒸发炉中注水，待蒸发炉中水位到达工作水位后启动向消化管中加水，加水完成后启动向消化管中加碱，加碱完成后启动蒸馏计时，当蒸馏时间到，仪器自动切断蒸发炉加热电源，并启动蜂鸣器报警，提示用户本次样品的蒸馏已经完成，可以取下三角接收瓶进行滴定。

5. 滴定和计算：

取下三角接收瓶，用0.1N 浓度的HCI来滴定接收瓶内的接收液，观察液体颜色由绿色变为淡紫色时为止，记下消耗的HCI的量，按下式计算蛋白质含量：

蛋白质含量％=（V—V0）N×0.014×A×100/ W

式中：V——消耗HCL的ml数；

      V0——空白试验时消耗的HCI的ml数；

      N——HCL的当量浓度；

      0.014——1ml HCI的克当量；

      A——样品中含氮量与蛋白质的转换系数；

      W——样品重量g。

注：空白测定——用0.1克糖代替样品或不加样品做空白测定。

6. 仪器清洗：

如果你在做完试样后不需再做其他的试样，那么请你在关机前对蒸馏器进行清洗，请先准备好1500ml以上的温度在40℃—50℃左右的水（40℃—50℃左右的水对清洗碱效果最好）。在蒸馏器上装消化管的位置上装上清洗管（清洗管的外形和消化管一样，只是清洗管上多了一个出水的水嘴），在清洗管的水嘴上套上橡胶管，橡胶管的另一端放入下水道。将原先放在碱容器内的橡胶管放入盛有1500ml以上水的容器内，然后按清洗键，清洗时间应不少于1分钟。

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