食品中腐霉利残留量的检测方法 —— 气相色谱 - 质谱法
腐霉利是常用果蔬、粮油类杀菌剂，广泛用于农作物病虫害防治，易在农产品及加工食品中形成农药残留。该物质过量摄入会损害人体肝肾机能，影响内分泌系统，长期食用超标食品存在健康隐患。
本方法参考 SN/T 2230-2008《进出口食品中腐霉利残留量的检测方法 气相色谱 - 质谱法》，本方法适用于茶叶、脐橙、板栗、葡萄酒、洋葱、小米、蜂蜜、鱼肉、鸡肝、猪肝中腐霉利残留量的测定。
一、方法原理
试样采用丙酮 - 正己烷振荡提取，石墨化碳固相萃取柱或中性氧化铝固相萃取柱净化，气相色谱 - 质谱仪测定和确证，外标法定量。
二、主要仪器和试剂
a. 气相色谱 - 质谱联用仪：GC138N-MS8300N，上海仪电分析仪器有限公司；
b. 液体自动进样器：AS-9，上海仪电分析仪器有限公司；
c. 毛细管色谱柱：DB-5MS，30m × 0.25mm × 0.25 μm；
d. 标准储备液：乙腈中腐霉利标准溶液，ρ=100 mg/L，有证标准溶液；
e. 正己烷，色谱纯；
f. 丙酮，色谱纯；
g. 氯化钠；
h. 乙腈，色谱纯；
i. 一般实验室常用仪器和设备。
三、实验方法
3.1 气相色谱参考条件
进样口温度：250℃；
柱流量：1.0mL/min，恒流模式；
进样模式：不分流进样；
不分流时间：0.75min；
不分流流量：60 mL/min；
柱箱升温程序：初始温度 100℃，保持 1min，以 10 ℃/min 升温到 280 ℃，保持 11min；
载气：高纯氦气。
3.2 质谱参考条件
离子源：电子轰击离子源 (EI)；电子能量：70eV；
离子源温度：250℃；
传输线温度：280℃；
扫描方式：全扫描模式（SCAN）定性，质谱扫描范围：35 amu 至 350 amu。选择离子监测（SIM）定量；
溶剂延迟：8min。
3.3 标准系列的制备
标准系列溶液：取 7 个洁净的 1 mL 容量瓶，预先加入适量的正己烷溶液，再分别加入 5 μL、10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、200 μL 和 500 μL 的腐霉利标准使用液（ρ=10 μg/mL），再用正己烷定容至刻度线，配制成腐霉利浓度分别为 0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL 和 5.0 μg/mL 的标准系列。参照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析。以腐霉利的浓度为横坐标，响应为纵坐标建立标准曲线。
3.4 样品处理
3.4.1 提取
对于茶叶、板栗、蜂蜜、小米样品，称取 1g 试样（精确至 0.001g）。对于脐橙、葡萄酒、洋葱、鱼肉、鸡肝、猪肝样品，称取 2g 试样（精确至 0.001g）。
将称取的试样置于 15mL 离心管中，加入 1g 氯化钠，加入 2mL 水，于混匀器上混匀 30s，放置 15min。加入 3mL 丙酮 - 正己烷（1+2），在混匀器上混匀 2min。3000r/min 离心 1min，吸取上层萃取液于另一试管中。再分别加入 3mL 丙酮 - 正己烷（1+2）溶液重复提取两次，合并萃取液。
3.4.2 净化
3.4.2.1 茶叶、脐橙、板栗、葡萄酒
将石墨化碳黑固相萃取柱（柱内填约 1cm 高的无水硫酸钠层）安装在固相萃取的真空抽滤装置上，先用 4mL 丙酮 - 正己烷（1+1）预淋洗萃取柱，弃去全部预淋洗液。将提取液加入到石墨化碳黑固相萃取柱中，待提取液全部流出后，再用 3mL 丙酮 - 正己烷 (1+1) 洗脱萃取柱，保持流速 1.5mL/min，收集全部流出液，45℃下氮气吹至近干。用正己烷定容至 0.5mL，供 GCMS 测定。
3.4.2.2 洋葱、小米、蜂蜜、鱼肉、鸡肝、猪肝
将中性氧化铝固相萃取柱（柱内填约 1cm 高的无水硫酸钠层）安装在固相萃取的真空抽滤装置上，先用 4mL 丙酮 - 正己烷（1+1）预淋洗萃取柱，弃去全部预淋洗液。将提取液加入到中性氧化铝固相萃取柱中，待提取液全部流出后，再用 3mL 丙酮 - 正己烷 (1+1) 洗脱萃取柱，保持流速 1.5mL/min，收集全部流出液，45℃下氮气吹至近干。用正己烷定容至 0.5mL，供 GCMS 测定。
3.5 测定
3.5.1 色谱测定与确证
根据样液中腐霉利的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，对标准工作液和样液等体积穿插进样，测定标准工作溶液和样液中腐霉利的响应值均应在仪器检测的线性范围内。
在相同实验条件下，样品中待测物质的质量色谱保留时间与标准工作液相同，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选离子均出现，经过对比所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见表 1）则可判定样品中存在对应的待测物。
表 1 使用气相色谱质谱定性时相对离子丰度最大容许误差
相对丰度（基峰）/% >50 >20~50 >10~20 ≤10
GCMS 的相对离子丰度最大容许误差 /% ±10 ±15 ±20 ±50
3.5.2 空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
四、实验结果
4.1 测试谱图
图 1 腐霉利标准物质的总离子流色谱图
图 2 腐霉利标准物质的质谱图
4.2 标准曲线
图 3 腐霉利校正以及校正曲线
4.3 结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中腐霉利的含量：
X=(A×Cs×V)/(As×m)
式中：
X—— 试样中腐霉利的残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A—— 试样中腐霉利的峰面积；
Cs—— 标准工作液中腐霉利的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
As—— 标准工作液中腐霉利的峰面积；
V—— 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m—— 最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。
注：计算结果须扣除空白值。
4.4 检出限计算
以正己烷为空白，取 7 个洁净的 1mL 容量瓶，分别加入适量的腐霉利标准使用液 (10 μg/mL)，配成腐霉利浓度为 0.025mg/kg 的空白加标溶液，按仪器条件平行测定 7 次，计算 7 次测定结果的标准偏差，再使用标准偏差乘以 3.143，得到腐霉利的方法检出限。结果见表 2。
表 2 腐霉利的方法检出限测试结果
化合物名称 空白加标浓度 0.025mg/kg 平均值 (mg/kg) SD (mg/kg) MDL (mg/kg)
腐霉利 0.0293、0.0298、0.0293、0.0299、0.0304、0.0302、0.0296 0.0298 0.000436 0.00137
4.5 精密度测试
以正己烷为空白，取 6 个洁净的 1mL 容量瓶，分别加入适量的腐霉利标准使用液 (10 μg/mL)，配成腐霉利浓度为 0.05mg/kg 的空白加标溶液，按仪器条件平行测定 6 次，计算 6 次测定结果的相对标准偏差，结果见表 3。按上述相同步骤测定空白加标浓度为 0.75 mg/kg 的精密度数据，结果见表 4。
表 3 空白加标浓度 0.05 mg/kg 精密度测试结果
化合物名称 空白加标浓度 0.05mg/kg 测试结果 (mg/kg) 平均值 (mg/kg) SD (mg/kg) RSD (%)
腐霉利 0.0463、0.0487、0.0484、0.0476、0.0483、0.0473 0.0476 0.001002 2.11
表 4 空白加标浓度 0.75 mg/kg 精密度测试结果
化合物名称 空白加标浓度 0.75mg/kg 测试结果 (mg/kg) 平均值 (mg/kg) SD (mg/kg) RSD (%)
腐霉利 0.70、0.68、0.67、0.70、0.70、0.67 0.6858 0.01429 2.08
4.6 正确度测试
以正己烷为空白，取 6 个洁净的 1mL 容量瓶，分别加入适量的腐霉利标准使用液 (10 μg/mL)，配成腐霉利浓度为 0.05mg/kg 的空白加标溶液，按仪器条件平行测定 6 次，计算 6 次测定结果的回收率，结果见表 5。按上述相同步骤测定空白加标浓度为 0.75 mg/kg 的回收率数据，结果见表 6。
表 5 空白加标浓度 0.05 mg/kg 回收率测试结果
化合物名称 空白加标浓度 0.05mg/kg 含量 (mg/kg) 回收率 (%) 回收率范围 (%)
腐霉利 0.0463、0.0487、0.0484、0.0466、0.0483、0.0473 92.5、97.3、96.7、93.2、96.5、94.5 92.5~97.3
表 6 空白加标浓度 0.75 mg/kg 回收率测试结果
化合物名称 空白加标浓度 0.75mg/kg 含量 (mg/kg) 回收率 (%) 回收率范围 (%)
腐霉利 0.70、0.68、0.67、0.70、0.70、0.67 92.7、90.7、89.3、93.3、93.3、89.3 89.3~93.3
4.7 样品测试结果
对花生样品按照仪器条件进行测定，结果如表 7 所示。
表 7 花生样品测定结果
化合物名称 测试结果 (mg/kg) 测试结果 (mg/kg) 平均值 (mg/kg) 两次平行测定结果的绝对差值 (mg/kg)
腐霉利 ND ND ND 0.00
注：ND = 未检出

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